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窖泥功能菌的純化分離及在百年老窖上的應(yīng)用(1)
來(lái)源:  2015-12-21 10:52 作者:

     窖池是濃香型大曲酒生產(chǎn)的基礎(chǔ)設(shè)備,是酒醅發(fā)酵的密閉容器。窖泥作為其組分,與曲酒的生產(chǎn)關(guān)系密切。

     在酒醅長(zhǎng)期發(fā)酵的過(guò)程中,經(jīng)微生物發(fā)酵產(chǎn)生的有機(jī)酸、乙醇、酯香類(lèi)物質(zhì)等逐漸浸泡到窖泥中,窖泥作為粗制培養(yǎng)基,富集培養(yǎng)成產(chǎn)酯生香的厭氧功能菌,這些功能菌中的優(yōu)勢(shì)微生物群落為梭狀芽孢桿菌,它能利用底物產(chǎn)生乙酸、丁酸及少量己酸,為生成白酒中的主題香味物質(zhì)——己酸乙酯做基礎(chǔ)物質(zhì)。

     使用人工窖泥大大縮短了窖泥老熟的過(guò)程,為濃香型曲酒的質(zhì)量奠定了基礎(chǔ)。但以前由于我們?nèi)斯そ涯嗟呐浞揭恢辈捎谩捌咝潜倍贰惫に嚕囵B(yǎng)配方不合理,菌種易老化,以及在生產(chǎn)過(guò)程的操作不當(dāng)、養(yǎng)護(hù)不到位,致使一段時(shí)間后出現(xiàn)老化。

     過(guò)去,我們多采取定期更換窖泥的方法,但新更換的窖泥在一兩年內(nèi)又影響糧食酒的質(zhì)量。自2001年以來(lái),我們公司根據(jù)多年的研究,從自己的優(yōu)質(zhì)老窖池窖泥中分離適合自己的窖泥功能菌,同時(shí)更新窖泥配方,提出了打造百年老窖的新思路。

     窖泥功能菌是指棲息在優(yōu)質(zhì)老窖泥中,長(zhǎng)期生長(zhǎng)、代謝和繁殖,對(duì)濃香型白酒典型風(fēng)格的形成起著關(guān)鍵作用的多種有益微生物群系。應(yīng)用其培養(yǎng)的功能性窖泥是指通過(guò)強(qiáng)化有益功能菌的種類(lèi)和數(shù)量,改善微生物的生長(zhǎng)環(huán)境,使有益功能菌在良好的環(huán)境中,長(zhǎng)期處于旺盛繁殖狀態(tài)的人工窖泥。其主要特點(diǎn)為:使用功能性窖泥改造窖池,可加速新泥老熟,延長(zhǎng)窖泥使用周期,改善窖泥風(fēng)味,增加窖泥酯香,驅(qū)除窖泥臭味,防止窖泥老化,完善酒體風(fēng)格,提高酒體質(zhì)量。

     1.窖泥功能菌的分離與純化

     1.1 試驗(yàn)材料

     1.1.1 我公司一車(chē)間30年以上窖齡的優(yōu)質(zhì)窖池池底窖泥。

     1.1.2 窖泥功能菌分離培養(yǎng)基:K2HPO4  0.04 %,(NH4)2SO4  0.05%,CH3COONa  0.5%,CaSO4  1% ,MgSO4  0.02%,酵母膏0.1%,乙醇2%,瓊脂 2%,pH7。

     1.1.3 無(wú)菌吸管、試管、培養(yǎng)皿、生理鹽水、活塞真空干燥器。

     1.2 試驗(yàn)方法

     1.2.1 系列稀釋?zhuān)悍Q(chēng)取10克窖泥,制成10-2、10-3、10-4、10-5 等不同濃度的懸液。

     1.2.2 傾倒平皿稀釋?zhuān)喝?只培養(yǎng)皿,編號(hào),選擇適宜的稀釋度10-3、10-4、10-5,分別從中吸取0.2mL懸液,加入空皿中,然后將經(jīng)滅菌的固體培養(yǎng)基用水浴融化,待冷卻至50—55度時(shí),分別倒入平皿,每皿約傾倒15mL,迅速搖勻后置于桌面,整個(gè)過(guò)程應(yīng)在酒精燈火焰附近操作。

     待培養(yǎng)基凝固后,將培養(yǎng)皿置于80kpa真空度的干燥器中,于32℃—34℃恒溫培養(yǎng)5天。

     1.2.3 劃線分離:左手持平皿,右手持接種針。用接種針在火焰上滅菌后,沾取一環(huán)適宜稀釋度的懸液,在火焰附近用左手拇指、食指掀開(kāi)皿蓋,迅速劃線,將平皿分成3個(gè)區(qū)域。劃線后的培養(yǎng)皿置于80kpa真空度的干燥器內(nèi),于32℃—34℃恒溫培養(yǎng)5天。

     1.2.4純化:分離工作反復(fù)進(jìn)行,直至獲得滿(mǎn)意的單菌落群培養(yǎng)為止。

     2.窖泥功能菌分離純化過(guò)程中的檢測(cè)和鑒定

     2.1 直觀檢驗(yàn)

     從平皿中選取生長(zhǎng)良好的菌落,用接種環(huán)取一環(huán)接種于盛有巴氏液體培養(yǎng)基的細(xì)頸試管中,在厭氧條件下培養(yǎng):

     第1—3天,基本上不產(chǎn)己酸;

     第4—6天,有少量氣泡產(chǎn)生,菌種大量繁殖,并開(kāi)始產(chǎn)己酸;

     第7—8天,文章來(lái)源華夏酒報(bào)成熟,顏色由白色轉(zhuǎn)為淡黃色,最終pH 值為6.0—6.5,有突出的己酸味;

     繼續(xù)培養(yǎng)至10—12天,產(chǎn)酸量達(dá)到高峰,經(jīng)色譜分析,己酸含量達(dá)200—250mg/100mL。

     2.2 顯微鏡檢查

     窖泥功能菌在顯微鏡下,菌體呈梭狀,革蘭氏染色陰性。其伴生菌是一種產(chǎn)甲烷菌,也是革蘭氏陰性菌,但直徑小于己酸菌;其污染菌丁酸菌是革蘭氏陽(yáng)性梭狀芽孢桿菌。

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編輯:張怡
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